Американский гнилец пчёл — (лат. — Histolysis infectio saperniciosa larva apium, Pestis apium Atamericana; англ.— Atamerican foulbrood; бранденбургский гнилец, вирулентный гнилец, злокачественный гнилец) — болезнь печатного расплода, сопровождающаяся разложением (гниением) личинок и предкуколок.
Историческая справка. Заболевание с признаками поражения и гибели личинок было известно в Древней Греции, Риме и Египте. Аристотель (384—322 годах до нашей эры) отмечает при этом неприятный запах из ульев.
Сведения о гнильце на территории нашей страны можно найти в Переписных книгах государевых пасек за 1621—1675 годах. На бактериальную природу гнильца впервые обратил внимание Преусс в 1868 году. Однако возбудитель болезни был установлен в США Уайтом только в 1904 г. и почти одновременно на территории Германии.
Американский гнилец считают наиболее опасным заболеванием медоносных пчел, поскольку из-за гибели расплода происходит резкое ослабление семей и их последующая гибель. Болезнь отнесена к числу карантинных болезней пчел, помещена в группу Б (МЭБ), подлежащих обязательной регистрации.
Встречается в умеренных и субтропических зонах мира с развитым пчеловодством. На территории бывшего СССР американский гнилец обнаруживали в 56,6 % всех проб пораженного расплода. Особенно интенсивно он проявлялся в Закавказье и Средней Азии.
Экономический ущерб, наносимый американским гнильцом, значительно выше, чем от всех остальных болезней расплода. Больная семья недобирает в год от 5 до 40 кг меда и 0,5 кг воска, опылительная деятельность снижается на 30 — 80 %. Однако основные потери нередко связаны с уничтожением на неблагополучных пасеках семей вместе с ульями и сотами.
Этиология:
Возбудитель — Paenibacillus larva esubsp. larvae, тонкая с умеренно закругленными концами грамположительная палочка.
Петрих образует овальные центрально или термально расположенные эндоспоры, факультативный анаэроб. В мазках клетки возбудителя располагаются поодиночке, но нередко в виде длинных тонких нитей.
Температурные границы роста 20 — 45 °С, оптимум 34 — 37 °С. В качестве добавок к питательным средам, содержащим ростовые вещества, используют экстракт личинок пчел, яичный желток с молоком или дрожжами и другие. Р. 1. larvae также хорошо растет на развивающихся куриных эмбрионах.
При росте Р. 1. larvae выделяет антибиотические вещества, препятствующие развитию грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов, но не действующие на кислотоустойчивые бактерии. Благодаря этой особенности другие микроорганизмы в погибших от американского гнильца личинках обычно не развиваются.
Споры возбудителя американского гнильца очень устойчивы во внешней среде, способны выживать многие годы в корме пчел, почве, сухих остатках погибших личинок. Из корочек личинок, хранящихся в запаянных ампулах, возбудитель выделяли через 75 — 89 лет. В растворе антибиотиков он был жизнеспособен в течение 35 лет (Lodesane, 2001).
По данным А. М. Смирнова, споры способны к прорастанию на средах через 15 лет, в вощине — 5 лет, почве — до 2 лет (срок наблюдения). Если вегетативные клетки в бульонной культуре при нагревании до 60 °С погибают через 15 мин, то споры в воде при 100 °С — через 30 минут, в воске при 121 °С — 30 минут, в меде при 100 °С — 160 минут; 110 °С — 41 минута.
Сулема в разведении 1:100 убивает споры через 4 — 5 дней; 5 — 10%-ный раствор формалина — через 6 часов; 1%-ный раствор перекиси водорода, подкисленный кислотой, — через 3 ч, 5%-ный раствор карболовой кислоты — за несколько месяцев. В спиртовом растворе прополиса они сохранялись более 45 дней.
Эпизоотология:
Наряду с медоносной пчелой (Apismellifera) этому заболеванию подвержены: восковая и гигантская пчелы, осы.
Устойчивы к заражению лабораторные животные: голуби, белые мыши, крысы, кролики, морские свинки.
Инфекционны споры бациллы. Вегетативные клетки не вызывают заболевания в семьях пчел. К заражению восприимчивы только молодые личинки маток, рабочих пчел, трутней в возрасте 24 — 28 часов.
У взрослых личинок споры хотя и прорастают, но вегетативные клетки не достигают эпителия кишечника и выводятся с фекалиями, поэтому взрослые пчелы устойчивы к заражению американским гнильцом, однако являются носителями спор Р. 1. larvae, которые сохраняются в их пищеварительном тракте более 2 месяца, не теряя своей инфекционности для молодых личинок.
Источник возбудителя инфекции: погибшие личинки в запечатанном расплоде, в трупах которых формируется от 1,5 миллиарда до 2,5 миллиардов спор, корма и соты из больных семей пчел внутри семьи возбудитель разносят в основном внутриульевые молодые пчелы, мёд, соты, инвентарь
Факторы распространения заболевания: восковая моль, кожееды, клещи, муравьи, лжескорпионы, блуждание и воровство пчёл, кочёвки и перевозки семей.
Молодые пчёлы при чистке сотовых ячеек инфицируют личинки во время их кормления. Питаясь сотами, личинками, трупами пчел, они механически на теле и с калом разносят споры.
Ослабление пчел возбудителями других болезней (европейский гнилец, варрооз, нозематоз, аскосфероз и так далее) и вследствие отравлений также обусловливает снижение резистентности семьи. Поэтому смешанные инфекции протекают более тяжело и чаще заканчиваются летально.
Американский гнилец возникает в любое время года при наличии расплода в семье. Наиболее интенсивно болезнь проявляется во второй половине лета, июле—августе, чему способствует перегревание семей. Болезнь ослабевает в период главного медосбора в результате уменьшения концентрации возбудителя, сокращения расплода.
Патогенез: При заглатывании спор Р. 1. larvae вегетативные клетки прорастают в содержимом средней кишки в течение 24 часа. Они очень подвижны, мигрируя через перитрофическую мембрану, проникают в эпителиальные клетки, вызывая их гибель. Как за счет фагоцитоза, так и самостоятельно возбудитель проникает в гемоцель насекомого, разносится по всему организму, где начинает интенсивно размножаться.
Личинка, зараженная до периода окукливания, продолжает развиваться, плетет кокон, приступает к метаморфозу; в период покоя после плетения кокона, стадии предкуколки или куколки из-за бактериемии происходит распад тела, споруляция бактерий. Иногда гибель личинок и образование спор может наступить до запечатывания расплода. Возбудитель в погибшей личинке присутствует практически в чистой культуре.
Клинические признаки: Пчелиные семьи болеют с весны до осени, чаще в июле — августе. Инкубационный период обычно длится 9 — 10 дней, изредка 2 — 3 дня.
Заболевание протекает в скрытой (бессимптомной) и явной формах. Обычно бессимптомный период предшествует проявлению явных признаков.
При скрытой форме:
возбудитель болезни обнаруживают у взрослых особей пчелиной семьи и в меде;
пчелы-кормилицы распознают заболевших личинок и удаляют их из расплода; в этот период может быть удалено до 50 — 90 % больных особей; основное изъятие приходится на возраст 0,5 — 1,5 дня;
при осмотре сотов отмечают признаки болезни только у личинок в возрасте 4 дней и старш;
единственный признак при этой форме болезни — это неравномерное, пестрое расположение расплода на соте;
При явной форме болезни расплод пестрый:
на соте среди ячеек нормального печатного расплода встречаются беспорядочно расположенные ячейки с проваленными крышками, с отверстиями или без них;
поражается пчелиный расплод, редко — трутневый и маточный;
возраст пораженных личинок не всегда однороден, но чаще признаки болезни выявляют на 10 — 15-й день развития пчелы;
при ярко выраженном заболевании возможна гибель личинок в раннем возрасте, в открытом расплоде;
личинка теряет нормальный тургор, сегментация тела нечеткая, окраска мутная, без блеска, а затем светло-бурая;
некоторые крышки над печатным расплодом становятся окрашенными, как бы влажными;
центр крышек опускается под массой погибшей личинки, прикрепленной к внутренней стороне крышки;
в отдельных крышках имеются различной величины и формы отверстия, чаще одно, реже два и более;
недавно погибшие личинки светло-бурого цвета, по мере разложения они становятся шоколадного цвета, темно-коричневыми; тело личинки размягчается и превращается в гнилостную массу, образующую при выделении тонкие длинные нити, что является диагностическим признаком;
погибшие куколки также подвержены мацерации, остатки их лежат на дне ячейки, иногда с выступающим над массой язычком — остатком головного конца, реже вверх торчат членики одной или более ног;
через 20 — 30 дней гнилостная масса высыхает и превращается в плотную хрупкую корочку темно-коричневого или черного цвета, плотно прилипшую к нижней боковой стенке ячейки;
масса имеет характерный неприятный запах столярного клея;
при интенсивном инфицировании расплода пчелы покидают пораженные соты, уходят за разделительную доску и при возможности начинают строить новые соты; в некоторых случаях слетают;
как правило, без оказания помощи заболевшая семья пчел погибает; зараженные семьи могут перезимовать, но в следующем сезоне плохо развиваются, подвергаются нападению пчел сильных семей и служат источником болезни на пасеках.
Патологоанатомические изменения:
Стадии изменений у личинок, зараженных американским гнильцом:
в 1-й стадии происходят изменение формы и сглаживание сегментации, на теле обнаруживают грязно-желтые пятна, тело вытянуто в длину ячейки;
на 2-й стадии отмечают потерю формы и сегментации; трупы личинок искривлены, коричневые, слизистой консистенции, появляется неприятный запах клея;
на 3-й стадии тело превращается в кофейно-коричневого цвета гнилостную массу, с трудом выделяемую из ячейки;
4-я стадия характеризуется образованием темно-коричневых струпов личинки, плотно прикрепленных к ячейке;
Последние три стадии инфекционны!
Диагноз ставят по:
данным эпизоотологии;
признакам болезни;
результатам микроскопии (обнаружение возбудителя в материалах из трупов личинок) и выделению чистой культуры;
ускоренно с помощью серологических реакций.
Предварительный диагноз при явной форме болезни устанавливают по клинико-патологическим признакам. Окончательно диагноз подтверждают после проведения лабораторных исследований.
Согласно методическим указаниям по лабораторной диагностике американского гнильца от 18.08.86г. в лабораторию высылают соты размером 10 х 15 см, содержащие максимальное количество измененного расплода.
Для обнаружения в ячейках корочек можно использовать ультрафиолетовое освещение, вызывающее флуоресценцию последних.
Из исследуемого материала готовят водную суспензию, окрашивают и микроскопируют, обнаруживая грамположительные вегетативные клетки и споры возбудителя. В каплях воды, заключенных в масло, также видно броуновское движение спор Р. 1. larvae. Для идентификации возбудителя и дальнейшего проведения биохимических тестов осуществляют культивирование Р. 1. larvae.
Для выявления скрытой формы американского гнильца и оценки санитарного состояния пасек проводят исследование меда на наличие спор Р. 1. larvae. В ряде случаев возникает также необходимость исследования искусственной вощины, воска, пыльцы с целью выявления поверхностного загрязнения спорами Р. 1. larvae.
Помимо бактериологических диагностика болезни возможна и различными серологическими методами: РА, РСК, РИД, прямой и непрямой РИФ, ИФА, газожидкостной хромотографии. В последние годы интенсивно развивается диагностика с применением ПЦР.
Американский гнилец необходимо дифференцировать от:
порошковидного расплода
европейского гнильца
парагнильца
застуженного расплода
мешотчатого расплода
аскосфероза
аспергиллеза
Иммунитет:
Семьи пчел отличаются различной степенью устойчивости к заболеванию, связанной с поведенческой реакцией рабочих особей по обнаружению, вскрытию ячеек, удалению пораженных личинок.
В основе такой поведенческой реакции лежат генетические факторы. Установлена возможность передачи по наследству признаков устойчивости пчел к американскому гнильцу.
Устойчивые к американскому гнильцу семьи приобретают также определенную резистентность к аскосферозу, варроозу и акарапидозу.
В гемолимфе взрослых пчел и здоровых личинок из пораженных американским гнильцом семей выявлены относительно специфические агглютинины.
Производство вакцин на территории России не освоено.
Профилактика:
Профилактика болезни направлена на предупреждение заноса возбудителя, его накопления в гнездах пчел и передачи, а также повышение резистентности семей.
Пасеку формируют только здоровыми семьями пчел, что должно быть подтверждено благополучием окружающих пасек в зоне 5 км от хозяйства-поставщика; отсутствием американского гнильца в течение последних 2 лет по записи в паспорте пасек; тщательным осмотром семей пчел и контролем санитарного содержания пасеки; отрицательными результатами лабораторных исследований меда, взрослых пчел и расплода на споры Р. 1. larvae.
Благополучие семей (пакетов), маток подтверждается справкой (форма вет. 1). Пчел перевозят (пересылают) в чистых, продезинфицированных ульях (пакетах), на светлых сотах, бывших в употреблении не более 2 лет, или в бессотовых пакетах. Поступивших пчел размещают на изолированных участках (в 6 — 7 км от пасеки), наблюдают за ними в течение 45 дней (требование МЭБ) и только после получения отрицательных результатов передают на основную пасеку.
При выезде на медосбор необходимо учитывать благополучие местности и соседних пасек по американскому гнильцу.
Предупреждение американского гнильца требует строгого соблюдения санитарных правил содержания пчел, территории пасеки и подсобных помещений. Весной при ревизии семей их пересаживают в продезинфицированные улья; на каждой пасеке необходимо иметь не менее 15 % запасных ульев.
Очень важно ежегодно обновлять не менее 1/3 сотов гнезда. Срок эксплуатации сотов, включая соты магазинных надставок, не должен превышать 2 лет.
В активный период жизнедеятельности пчелиной семьи не допускают ее перегревания, систематически проводят осмотр расплода во всех семьях пасеки с целью определения его состояния и своевременного выявления заболевания.
Недопустимы обезличенное осушивание пчелами сотов после откачки меда и скармливание сиропа из общей кормушки на пасеке из-за возможности переноса спор и развития пчелиного воровства.
Важным моментам в профилактике всех заболеваний является повышение общей резистентности пчел.
Скармливание антибиотиков и сульфаниламидных препаратов для профилактики болезни на пасеках нецелесообразно, так как это делает мед непригодным к реализации из-за остатков в нем препаратов.
Ульи, соты, инвентарь подвергают профилактической дезинфекции, проводят очистку и побелку складских помещений, еженедельно очищают предлетковые площадки.
Лечение:
Лечение больных семей пчел с явными признаками болезни и при скрытой форме неээфективно.
В связи с ужесточением требований к чистоте продуктов пчеловодства от остатков лекарственных препаратов следует учитывать длительность их сохранения в меде. Ведутся поиски безопасных лечебных средств
Пчёлам дают 3 — 4 раза через каждые 5 — 7 суток лечебный сахарный сироп по 100 — 150 мл на улочку.
На 1 л сиропа (1 часть сахара, 1 часть воды) добавляют норсульфазол натрия — 1,0 г, сульфантрол — 2,0 г или один из антибиотиков: биомицин, стрептомицин — 500 тыс. ЕД, неомицин, тетрациклин, окситетрациклин, мономицин — 1000 тыс. ЕД.
Меры борьбы:
поражённые семьи изолируют и перегоняют вечером на листы искусственной вощины в продезинфицированные ульи
соты от больных семей перетапливают на воск, который стерилизуют в автоклаве при t 127ºC в течение 2 час
землю на месте стоянки улья перекапывают и обрабатывают хлорной известью (1 кг на 1 м2)
ульи дезинфицируют 10% ной подкисленной перекисью водорода, 5% ным щелочным формальдегидом
При установлении заболевания пчел американским гнильцом пасеку и территорию вокруг нее в радиусе 5 — 7 км объявляют неблагополучными и накладывают карантин.
Внутри неблагополучной зоны осматривают все семьи пчел и отбирают от них мед на исследование с целью обнаружения спор Р. 1. larvae. По требованиям и условиям карантина запрещают вывоз с пасеки в другие хозяйства пчелиных семей, маток, продуктов пчеловодства, оборудования и инвентаря, выезд на медосбор.
Усиливают ветеринарный контроль за санитарным состоянием пасек, проводят строгую выбраковку всех хранившихся сотов; пригодные для использования соты, а также инвентарь и оборудование после тщательной механической очистки дезинфицируют. Исключают все пчеловодные приемы, ведущие к заражению семей на пасеках.
В ряде случаев принимают решение об уничтожении больных семей, что считается наиболее эффективным во многих странах мира, особенно при незначительном (до 1 %) распространении болезни. При невозможности уничтожения и в случае выявления более 2 % неблагополучных семей с явными признаками поражения используют методы одинарного или двойного перегона семей с голоданиями.
Соты после откачки меда обычно сжигают. Согласно отечественной инструкции соты, содержащие погибший расплод, перетапливают на воск, вытопки сжигают. Воск от пчелиной семьи с неблагополучных пасек направляют на технические цели.
Особую роль в борьбе с американским гнильцом играет дезинфекция. В нашей стране рекомендованы следующие способы и режимы обработки: ульи, подставки, рамки и другие деревянные предметы после тщательной механической очистки обжигают огнем паяльной лампы до побурения или обрабатывают одним из дезинфицирующих растворов (раствором пероксида водорода и муравьиной кислоты — трехкратно, щелочным раствором формалина —двукратно).
Рамки, разделительные решетки кипятят в растворе гидроксида натрия или каустифицированной содово-поташной смеси.
Мелкий металлический инвентарь прокаливают на огне или кипятят в растворе кальцинированной соды. Достаточно эффективна также газовая дезинфекция сотов, инвентаря, оборудования оксидом этилена и бромидом метила (ОКБЭМ). Воск стерилизуют на воскозаводах в автоклавах при 121 °С в течение 30 минут.
Лучшие результаты стерилизации сотов, инвентаря и оборудования могут быть получены физическими методами: гамма-облучением или электронами высокой скорости.
Почву под неблагополучным ульем перепахивают с известью. Карантин с неблагополучной пасеки и окружающей ее зоны снимают через 1 год после ликвидации заболевания, что устанавливают осмотром всех семей и подтверждают отрицательными двукратными результатами лабораторных исследований меда, взрослых пчел и расплода.
МЭБ рекомендует наблюдать за семьями пчел в течение 45 дней, не считая периода зимовки.
Доклад подготовил:
Директор Сальской районной
ветеринарной лаборатории
А.Т. Сарибекян
