Африканская чума свиней (лат. Pestis Africana suum), африканская лихорадка, восточно африканская чума, болезнь Монтгомери – высококонтагиозная вирусная болезнь домашних и диких свиней, характеризуется лихорадкой, цианозом кожи и обширными геморрагиями во внутренних органах, протекает в виде эпизоотии. Относится к списку А согласно Международной классификации заразных болезней животных.
Лабораторные мониторинговые исследования на африканскую чуму свиней являются крайне необходимыми.
Правила отбора и доставки проб в ветеринарные лаборатории
С целью мониторинга эпизоотической ситуации по африканской чуме свиней пробы патологического материала от больных и павших животных направляют в филиал ГБУ РО «Ростовская областная ветеринарная лаборатория», «Краснодарская МВЛ», ФГБУ «ВНИИЗЖ».
Отбор проб патологического материала и его доставка требуют выполнения ряда условий, обеспечивающих сохранение активности возбудителя в отобранных пробах и предусматривающих надежную упаковку, т.к. нарушение упаковки сопряжено с риском попадания вируса во внешнюю среду, что может привести к возникновению новых очагов болезни на благополучных по АЧС территориях.
При отборе и перевозке проб следует строго следовать ветеринарно-санитарным нормам и применять самые жесткие меры личной и общественной безопасности, руководствуясь Законом «О ветеринарии», Ветеринарным законодательством и положениями, которые утверждены Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации. Вскрытие трупов и отбор проб патологического материала следует выполнять в специализированном защитном костюме, руководствуясь СП 1.3.3118-13 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)».
Для установления диагноза или мониторинга АЧС при исследовании павших или убитых с диагностической целью домашних свиней отбирают:
— лимфатические узлы (подчелюстные, портальные и мезентеральные);
— кусочки селезенки по 5,0 – 10,0 граммов;
— кусочки легкого и почек, убитых в стадии агонии или не позже чем через 10 час после гибели.
От животных с повышенной температурой тела, имеющих клинические признаки болезни, отбирают пробы крови в количестве 3-5 мл, в специальные вакуумные пробирки с антикоагулянтом (6% раствор ЭДТА — вакутейнеры с фиолетовой крышкой), в соотношении 1:20 и пробы сывороток крови.
Отбор проб патологического материала от диких свиней (кабанов)
— лимфатические узлы (подчелюстные, портальные и мезентеральные);
— кусочки селезенки по 5,0 – 10,0 граммов. В случае аутолизиса трупа рекомендуется отбирать грудинную или трубчатую кость, независимо от ее состояния, отбирают от каждой обнаруженной павшей или отстрелянной охотниками дикой свиньи, независимо от пола, возраста и сезона года.
Упаковка и транспортировка патологического материала
Пробы указанных органов по 5 – 10 граммов помещают в стерильные флаконы, которые герметически закрывают резиновыми пробками, этикетируют, обрабатывают 5% раствором Хлорамина-Б или осветленным, 20% раствором хлорной извести, обвертывают марлей, смоченной одним из указанных дезинфицирующих растворов, укладывают в полиэтиленовые пакеты.
На внешней стороне пакета указывают номер пробы, который должен соответствовать номеру, указанному в сопроводительном документе. Если транспортировка занимает более чем 24 часа, пробы органов перед упаковкой замораживают при минус 10-18оС.
Пакеты с пробами герметично завязывают и помещают в термоконтейнер для транспортировки с хладоэлементами. Содержимое термоконтейнера перекладывают абсорбционным материалом для защиты от повреждений и предотвращения утечки жидкости.
На содержимое термоконтейнера составляют, в двух экземплярах, сопроводительное письмо, в котором описывают происхождение проб, указывают их номера, соответствующие маркировке пакета.
Закрытый и опечатанный контейнер снаружи обрабатывают смесью этанола (спирта ректификата) и эфира (1:1) и доставляют в сопровождении ветеринарного специалиста (с нарочным) в ветеринарную лабораторию.
Пробы отправляют в лабораторию с сопроводительным письмом, содержащим информацию о виде, поле и возрасте свиней, ставших источниками материалов. Указывается личный номер или кличка каждого животного, делается краткое описание клинических признаков, прикрепляется составленный протокол патологоанатомического вскрытия. Если животные содержались на свиноферме, следует уточнять данные по поводу категории и местонахождения каждой особи, которое закреплено за ее номером.
При подозрении АЧС среди диких свиней должно быть обозначено географическое место отстрела или локализации павшего животного на территории охотничьих угодий, заповедника и проч. Пробы органов и крови хранят и транспортируют в термосе при температуре 4-8оС, не более 24 ч после отбора. При более длительном хранении пробы замораживают при минус 10-18оС.
Грипп (инфлюэнца) птицы (Grippus (influenzae) avium, классическая чума птиц, европейская чума птиц) — высококонтагиозная, с острым течением болезнь, характеризующаяся явлениями септицемии, поражением органов дыхания и пищеварения.
Методические рекомендации по лабораторному мониторингу гриппа птиц на территории Российской Федерации
- Общие положения
1.1. Лабораторный мониторинг проводится в рамках мероприятий по предупреждению гриппа птиц на территории Российской Федерации.
1.2. Лабораторно-диагностические исследования проводятся в соответствии с Ветеринарными правилами лабораторной диагностики гриппа А птиц, Правилами по борьбе с гриппом птиц, Правилами по организации и проведению профилактических мероприятий по предупреждению гриппа птиц на территории Российской Федерации.
- Организация проведения лабораторного мониторинга
2.1. Исследования на грипп птиц проводят в ветеринарных лабораториях, имеющих необходимое оборудование, кадровый состав, диагностические наборы.
2.2. Национальная референтная лаборатория по гриппу птиц ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГУ ВНИИЗЖ) осуществляет контроль за применением стандартизированных диагностических средств и методов во всех ветеринарных лабораториях.
2.3. ФГУ ЦМВЛ является учреждением, осуществляющим методическое руководство деятельностью межобластных ветеринарных лабораторий и ветлабораторий субъектов Российской Федерации (областных, краевых, республиканских) при проведении мониторинга, сбор и обработку данных, составление сводного отчета по результатам исследований на грипп птиц.
2.4. Составление сводного плана мониторинга возлагается на ФГУ Центральную научно-методическую ветеринарную лабораторию. Сводный план мониторинга утверждается руководителем Россельхознадзора.
Ветеринарные лаборатории субъектов Российской Федерации, ФГУ межобластные ветеринарные лаборатории разрабатывают совместно с территориальными управлениями Россельхознадзора и органами управления в ветеринарии в субъектах Российской Федерации на основании Методических рекомендаций по лабораторному мониторингу гриппа птиц в Российской Федерации план мониторинга по гриппу на следующий календарный год к 1 декабря текущего года. Одновременно с планом субъектовые ветлаборатории составляют и передают в межобластные ветеринарные лаборатории данные о потребности в диагностических препаратах для диагностики гриппа птиц (ИФА, РТГА, РДП, ПЦР) с учетом объемов планируемых исследований, птицепоголовья в птицеводческих хозяйствах и населенных пунктах, обследования водоемов и периодичности отбора проб согласно настоящему порядку мониторинга.
ФГУ межобластные ветеринарные лаборатории составляют сводный план по региону обслуживания с учетом собственных исследований и направляют его к 10 декабря текущего года в ФГУ ЦНМВЛ вместе с информацией о потребностях в диагностических наборах.
ФГУ ЦНМВЛ составляет и направляет в Россельхознадзор сводный план мониторинга, информацию о потребности в диагностических наборах для выполнения работ по мониторингу гриппа птиц по каждому региону.
3. Мониторинговые исследования домашней птицы
3.1. Исследованию подлежит птица промышленных стад и племенных птицехозяйств, частного сектора (с индивидуальных подворий), птица, содержащаяся в птицепитомниках, зоосадах, синантропная птица, обитающая на территории птицехозяйств, птица, ввозимая на территорию Российской Федерации, а также при купле-продаже внутри страны, ввозимое на территорию Российской Федерации инкубационное яйцо.
3.2. В период карантина (в течение 21 дня) для исследования на наличие антител к вирусу гриппа птиц типа А отбирают не менее 25 проб сывороток крови от каждой партии птицы (если партия составляет более 1000 особей); при поставке от 10 до 1000 голов птицы — 10 проб; менее 10 — пробы крови отбираются от каждой птицы.
3.3. При ввозе на территорию Российской Федерации эмбрионов и инкубационного яйца для контроля на грипп используют метод ПЦР-диагностики. С этой целью отбираются трахеальные и клоакальные смывы от 25 птиц, 30 эмбрионов/инкубационных яиц. Для исследования рекомендуется формировать объединенные пробы: одну пробу из смывов от 5 голов птиц, одну пробу из 5 эмбрионов/инкубационных яиц.
3.4. Серологическое обследование мелких видов птиц (волнистые попугайчики, канарейки и др.) не проводят, а в период их содержания в карантине (в течение 21 дня) осуществляют отбор проб помета в зависимости от ввозимой партии. Отбор проб рекомендуется проводить индивидуально от каждой птицы или в виде общей пробы от птиц, содержащихся в одном вольере/клетке. В данном случае также можно отбирать клоакальные и/или трахеальные смывы, при этом отбор проб проводится аналогично отбору проб сывороток крови п.3.2.
3.5. Схемы серологического обследования птицеводческих хозяйств и подворий.
В благополучных племенных и товарных птицеводческих предприятиях яичного и мясного направления (куроводческих, индейководческих, гусеводческих и др.) отбирается от каждого стада птицы, содержащейся в одном птичнике (зале, корпусе), по 25 проб крови.
В страусоводческих хозяйствах обследованию подлежат 15% от стада взрослой птицы и 10% от молодняка.
Отбор проб в бройлерных хозяйствах проводится в момент убоя птицы в количестве не менее 25 проб сыворотки крови от стада птицы из одного птичника (зала).
В личных хозяйствах граждан отбирается не менее 25 проб сыворотки крови от птицы из одного населенного пункта, если количество птицы в населенном пункте более 100 голов, при этом необходимо обеспечить сбор проб крови от птицы из разных дворов, если в населенном пункте разведением птицы занимаются одновременно несколько граждан.
В населенных пунктах, где поголовье птицы составляет менее 100 голов, серологическое обследование не проводят. В данных населенных пунктах ведется наблюдение за клиническим состоянием птицы. В случае обнаружения признаков заболевания отбирается материал для лабораторного исследования в соответствии с пунктом 3.7.
На территории крупных птицеводческих хозяйств, комбикормовых предприятий отбирать по 10 проб крови от синантропных птиц (голуби, воробьи и др.).
3.6. В случае получения положительных результатов серологических исследований проводится отбор проб для вирусологических исследований и ПЦР-диагностики в соответствии с пунктом 3.7.
3.7. При подозрении на грипп птиц (наличие клинических, патологоанатомических признаков заболевания, внезапном падеже) в стадах домашней птицы рекомендуется проводить отбор проб для проведения ПЦР-диагностики и вирусологических исследований. Для исследований отбираются клоакальные и/или трахеальные смывы, помет, патматериал (головной мозг, легкие, трахея, селезенка, участки кишечника). Отбор и транспортировку трупов птиц, проб биоматериала и патматериала осуществляют в соответствии с пунктом 7.
- Мониторинговые исследования дикой птицы
4.1. Мониторинг дикой птицы необходимо проводить сезонно: весна, лето, осень (т.е. весенняя миграция, гнездование после вылупления птенцов, осенняя миграция) с привлечением зоологов и специалистов охотоуправлений в субъектах Российской Федерации.
4.2. Во время сезонных совместных экспедиций ветеринарных специалистов, зоологов и специалистов охотоуправлений в субъектах Российской Федерации пробы рекомендуется отбирать в местах массового гнездования птиц, зимовок, а также на пути основных миграционных маршрутов. Видовой состав птицы, подлежащей мониторингу, определяется в соответствии с особенностями каждого региона с привлечением специалистов охотоуправлений или зоологов. Исследованиям подвергаются синантропные (воробьи, голуби, грачи, вороны), полусинантропные (чайки), а также дикие мигрирующие виды водоплавающих и околоводных птиц (утки, гуси, массовые виды куликов, колониально гнездящиеся цапли и др.). Периодичность отбора проб указана в п.5. От отловленных птиц рекомендуется отбирать пробы сывороток крови, клоакальные и/или трахеальные смывы. Отловленные нетравмированные птицы, если применялся метод живоотлова, в случае отрицательного результата отпускаются. В случае положительного результата птицы умерщвляются бескровным методом и отправляются в лабораторию для дальнейших исследований. При проведении отстрела птиц или в случае их умерщвления в диагностических целях берутся клоакальные, трахеальные смывы и пробы патматериала.
Помет от дикой птицы, а также клоакальные, трахеальные смывы и патматериал исследуются методом ПЦР.
4.3. Для предупреждения отстрела редких видов птиц в состав совместной экспедиции включается специалист-орнитолог, зоолог или охотовед.
4.4. При выявлении в дикой природе случаев внезапного падежа птиц или в случае обнаружения при клиническом обследовании птицы на водоемах характерных клинических признаков болезни проводится отбор патматериала на вирусовыделение и для ПЦР-диагностики.
4.5. Положительные пробы из межобластных ветеринарных лабораторий и ветлабораторий субъектов Российской Федерации направляются для дальнейших исследований на грипп — в ФГУ ЦНМВЛ и Национальную референтную лабораторию по гриппу птиц в ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГУ ВНИИЗЖ).
- Рекомендуемая периодичность отбора проб
5.1. Домашняя птица обследуется: в благополучных регионах — 2 раза в год; в неблагополучных регионах и в угрожаемой зоне — один раз в месяц (каждый птичник, каждый населенный пункт): ввозимая из-за рубежа птица, эмбрионы, инкубационное яйцо — при ввозе, в период карантинирования.
5.2. Дикая птица обследуется: в благополучных регионах — 3 раза в год (весна, лето, осень); в неблагополучных районах — 1 раз в квартал.
- Рекомендуемые методы исследований
6.1. Иммуноферментный анализ (непрямой метод ИФА для выявления антител к гриппу типа А) — исследуют сыворотки крови с целью выявления антител к вирусу гриппа птиц у кур из птицеводческих предприятий, фермерских хозяйств, населенных пунктов и ввозимых из-за рубежа; патологический материал, экстраэмбриональную жидкость зараженных куриных эмбрионов на наличие вируса гриппа птиц.
6.2. Иммуноферментный анализ (конкурентный метод ИФА для выявления антител к гриппу птиц Н5) — исследуются сыворотки крови различных видов птиц на наличие антител к гриппу птиц Н5.
6.3. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) — исследуют сыворотки крови кур реагирующих положительно в ИФА; сыворотки крови других видов птиц (гусей, уток, индеек, голубей, дикой птицы и др.).
6.4. Реакция диффузионной преципитации (РДП) — исследуют сыворотки крови с целью выявления антител к вирусу гриппа у птиц различных видов. РДП может быть использована для выявления вируса гриппа птиц при исследовании патматериалов и для идентификации изолятов при проведении вирусологических исследований.
6.5 Полимеразно-цепная реакция (ПЦР) — исследования проводят:
при внезапном падеже птицы или характерных для гриппа клинических признаках;
при получении у птиц положительных результатов серологических исследований в ИФА и РТГА;
с целью определения типа гемагглютинина и нейраминидазы выделенных штаммов (ВНИИЗЖ, ВГНКИ);
при исследовании мяса птицы, полуфабрикатов, субпродуктов, яйца, куриных эмбрионов;
при исследовании комбикормов и мясокостной муки.
6.6. Серологические и вирусологические исследования рекомендуется проводить согласно действующей нормативной документации и наставлениям к диагностическим наборам. РТГА проводится с обязательной постановкой контроля проб сывороток крови на спонтанную агглютинацию. Сыворотка крови обрабатывается обязательно от термолабильных и в случае необходимости от термостабильных ингибиторов.
6.7. Диагностические наборы (ИФА, РТГА, РДП и ПЦР) получают ФГУ ЦНМВЛ, межобластные ветлаборатории и ветлаборатории субъектов Российской Федерации в соответствии с заявками.
- Порядок отбора и доставки проб
7.1. Отбор проб сывороток крови и патологического материала от всех категорий птицы организуют совместно специалисты СББЖ и районных, межрайонных, зональных ветеринарных лабораторий или диагностических кабинетов. Отбор проб осуществляет ветеринарный специалист, имеющий специальную подготовку.
7.2. Отбор проб сывороток крови. Отбор проб крови у птиц осуществляется в соответствии с планом мониторинга из подкрыльцовой вены, или при забое птицы взятие проб крови у больной или подозреваемой в заражении птицы проводят с соблюдением требований безопасности. Транспортировка проб сывороток крови в лабораторию осуществляется в стеклянных или пластиковых пробирках, закрытых крышками (пробками). Пробирки маркируются. В сопроводительном документе указывается: вид и возраст птицы, наименование предприятия и адрес (Ф.И.О. владельца, адрес), количество проб, дата отбора проб.
7.3. Отбор проб патологического и биологического материалов. При подозрении на грипп птиц (наличие клинических, патологоанатомических признаков заболевания, внезапного падежа) осуществляют отбор проб патматериала: головной мозг, легкие, трахея, селезенка, участки кишечника, почки, сердце. От каждого стада птицы отбирают для исследований 5-10 трупов или патматериал от 5-10 трупов, клоакальные и/или трахеальные смывы от 10-15 голов (смывы от 5 голов можно объединять в одну пробу), 1 пробу помета от стада. Пробу помета отбирают: примерно по 1 грамму помета из 60 точек птичника (выгула или вольеры), выбранных по диагонали крест-накрест.
Доставку трупов птиц и отобранных проб патматериала (органов, тканей) в лаборатории осуществляют в кратчайшие сроки во влагонепроницаемой таре, герметично упакованной. При доставке проб в течение 24 часов отобранные органы и ткани помещают в пластиковые контейнеры, герметичные целлофановые пакеты, упаковывают в широкогорлые термосы (небьющиеся) с сухим льдом или хладоэлементами.
Если доставка образцов длится более 24 часов, они охлаждаются и доставляются на льду (можно использовать хладоэлементы). Хранение суспензий из органов возможно до 4 дней при 4°С. Для увеличения сроков хранения образцы хранят при температуре -80°С. Хранение при 20°С может отрицательно сказаться на выделении вируса.
Образцы фекалий рекомендуется хранить и осуществлять их доставку при 4°С.
Клоакальные и трахеальные смывы можно доставлять в сухом виде или в транспортных средах.
7.4. Отбор проб биоматериала (трахеальные и клоакальные смывы, помет) осуществляется в целях мониторинговых исследований от клинически здоровой птицы, птицы, подозреваемой в заражении вирусом гриппа, и осуществляется аналогично отбору проб сывороток крови по пункту 3.2.
В населенных пунктах отбираются клоакальные и/или трахеальные смывы от 5-10 домашних птиц (при наличии в населенном пункте водоплавающей птицы отбор проб проводится прежде всего от данных видов).
Сбор проб помета осуществляется с 5 подворий одного населенного пункта (5 проб).
В случае выявления падежа дикой птицы или обнаружения диких птиц с характерными клиническими признаками заболевания вблизи населенных пунктов, расположенных у водоемов, отбор проб патологического материала осуществляют в соответствии с пунктом 7.3.
Для взятия и транспортировки смывов используют транспортные среды. Правила пересылки смывов в соответствии с пунктами 7.2 и 7.3.
7.5. Отбор проб от дикой птицы осуществляется в соответствии с п.4 и п.п.7.2, 7.3, 7.4 с привлечением зоологов и специалистов охотоуправлений в субъектах Российской Федерации.
При направлении на исследование проб сывороток крови, патматериалов или биоматериалов от дикой птицы необходимо указывать вид птицы, место отбора проб, количество проб, примерный возраст (взрослая, молодняк), дату отбора.
7.6. Пробы сыворотки крови и патматериал направляют нарочным с сопроводительным письмом в ветлаборатории субъектов Российской Федерации или в межобластные ветеринарные лаборатории.
7.7. Все положительные на грипп птиц пробы патматериалов, первичные изоляты, полученные при вирусологических исследованиях, в т.ч. изоляты низкопатогенных вирусов гриппа птиц, из межобластных ветеринарных лабораторий и ветлабораторий субъектов Российской Федерации направляются для дальнейших исследований на грипп в ФГУ ЦНМВЛ. Затем из ФГУ ЦНМВЛ в Национальную референтную лабораторию по гриппу птиц в ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГУ ВНИИЗЖ).
Начальник противоэпизоотического отряда
ГБУ РО «Ростовская облСББЖ с ПО»
А.А. Подопригора
